Aquí se presenta una batería de pruebas bioquímicas mas utilizadas en el campo o área de la microbiologia clínica. Espero sea de gran utilidad para ampliar sus conocimientos adquiridos.
Presentado por: Dr. Nicanor Finlay Henriquez
Nota: las pruebas bioquímicas tienen muchas variantes e interpretación aquí se menciona en forma general.
Baterías Bioquímicas
Prueba Tinción de Gram
Composición
Agua estéril, cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, safranina.
Indicadores
Ninguno
Reactivos de lectura
Ninguno
Fundamentos
La membrana de las bacterias contiene Peptidoglicano, cuando de adiciona cristal violeta y lugol forman un complejo cristal violeta- yodo.
La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona la capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta- yodo que se formó previamente.
Por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose el complejo azul violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicano, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta-yodo y manteniéndola la coloración azul violácea.
Interpretación
- Gram positivas:
moradas a azules
- Gram negativas
roja a rosa
Prueba
Oxidasa
Composición
Discos con N, N, N, N
Tetrametil-p-fenilendiamina.
Indicadores
Ninguno
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
Se basa en la producción bacteriana de una enzima oxidasa intracelular, esta reacción de oxidasa se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno molecular que a su vez, actúa como un receptor de electrones en la parte terminal del sistema de transferencia de electrones.
Reacción química: los colorantes de p-fenilendiamina son aminas aromáticas primarias derivados, diamino del benceno, el citocromo oxidasa no reacciona directamente con el reactivo p-fenilendiamina pero oxidasa al citocromo C que a su vez oxida al reactivo, la fenilendiamina es metilada y cuantos más grupos metilados introducen en el radical amino el color es más azul. Si se introducen tres grupos fenilos en ligar del metilo el color es aún más oscuro.
Interpretación
- Positivo:
Azul marino
- Negativo:
Sin cambio de color
Prueba
Catalasa
Composición
Peróxido de hidrogeno
30%
Indicadores
Ninguno
Reactivos de lectura
Ninguno
Fundamentos
La catalasa actúa como una enzima esencial de defensa biológica contra la toxicidad del oxígeno. La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua.
Interpretación
- Positivo:
Efervescencia burbujeo
- Negativo:
Sin cambios
Prueba
O/F Oxidación Fermentación.
Composición
Medio básico de Hugh Leifson peptona, NaCl, Fosfato de potasio, Hidratos de carbono, Agar, Agua destilada.
Indicadores
Azul de bromotimol, pH: Verde 7,0 Amarillo 6,0 Azul 7,6
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
Se basa en la determinación del metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrógeno de carbono. Son necesarios dos tubos del medio para la prueba. El medio de un tipo se expone al aire y el otro se cubre con aceite mineral o parafina líquido. Las bacterias oxidativas producen ácido solo en el tubo abierto expuesto al oxigeno atmosférico; los microorganismo fermentadores producen ácidos en ambos tubos; las bacterias no sacaroliticas son inertes en este medio y permanecen con un pH alcalino.
Interpretación
O/F
Amarillo a amarillo.
fermentativo facultativo
Amarillo a verde:
oxidativo
Azul- azul
No fermentador usa peptonas.
Prueba
Gota suspendida
Composición
Agua estéril
Indicadores
Ninguno
Reactivos de lectura
Ninguno
Fundamentos
Algunas bacterias son móviles por presentar flagelo, los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posiciones variadas. La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil.
Interpretación
- Positivo:
Movimiento de un lado a otro del campo.
- Negativo:
Sin movimiento o movimiento gausuano.
Prueba
TSI
hierro triple azúcar
Composición
Estrato de carne polipeptona, Cloruro de sodio, Lactosa, Glucosa, Sacarosa, Sulfato de hierro, Amonio, Tiosulfato de sodio, Agar.
Indicadores
Rojo de fenol pH:
Amarillo 6,8
Rojo 8,4
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
Ninguno Medio empleado para la diferenciación de la fermentación de glucosa, lactosa y la producción de ácido sulfúrico. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfúrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro, rojo de fenol es el indicador de pH, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Por fermentación de azucares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionado el típico sulfuro de hierro de color negro.
Interpretación
- Positivo para fermentación:
Rojo
- Negativo:
amarillo
Gas
- positivo:
cuarteado o botado el agar
- Negativo:
sin cambios
H2S
- positivo:
Negro
- Negativo:
sin cambios
Prueba
KIA
Agar de hierro de kliger
Composición
Extracto de carne peptona, Glucosa,
Citrato férrico amónico, Lactosa,
Cloruro sódico, Tiosulfato sódico,
Extracto de levadura.
Indicadores
Rojo der fenol
pH:
Amarillo 6,8
Rojo 8,4
Reactivos de lectura
Ninguno
Fundamentos
En este medio se observa si la bacteria es capaz de fermentar glucosa y lactosa, si es así los carbohidratos forman ácidos que hacen que vire el indicador del medio, además si tiene producción de ácidos sulfúrico; el tiosulfato es un intermediario que reduce el sulfato a H2S en el metabolismo de la bacteria, el tiosulfato remplaza al sulfato como de azufre.
El H2S reacciona con el citrato de amonio férrico, produciendo un precipitado insoluble negro. También sirve para ver la producción de gas, cualquier gas que produzca la bacteria. Fermentación de sacarosa: Pico o flauta. ácido- ácido: fermentador ácido-alcalino: no fermentador Alcalino- alcalino: no sacarolitica.
Interpretación
Gas:
- positivo
Cuarteado o botado el agar
- Negativo
Sin cambios
H2S:
- positivo
Coloración Negra
- Negativo
Sin cambios.
Prueba
Citratos
Composición
Sulfato de magnesio, Fosfato monobásico, Fosfato dipotasico, Citrato de sodio NaCl, Agar, agua desionizada
Indicadores
Azul de bromotimol pH.
Verde 7,0
Amarillo 6,0
Azul 7,6
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y compuesto amoniacales como única fuente de nitrógeno.
Interpretación
Medio sin inocular: verde
- Positivo:
azul de Prusia oscuro
- Negativo:
sin cambios
Prueba
Urea
Stuart
Composición
Fosfato monopotasico, Fosfato disódico,
Extracto de levadura,
Urea,
Agua desionizada
Indicadores
Rojo de fenol
pH:
Amarillo 6,8
Rojo 8,4
Reactivos de lectura
Ninguno
Fundamentos
Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio.
La hidrólisis de la urea es catalizada por la ureasa para dar dos moléculas de amonio. La ureasa es una enzima microbiana vinculada con la descomposición de los compuestos orgánicos.
Interpretación
- Positivo:
Rojo,
Rosado intenso en el pico de la flauta
- Negativo:
amarillo
Prueba
Urea
Cristensen
Composición
Peptona, NaCl, Fosfato monopotasico, Fosfato disódico, Glucosa,
Urea,
Agar,
Agua destilada.
Indicadores
Rojo de fenol
pH:
Amarillo 6,8
Rojo 8,4
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
Determina la capacidad de un microorganismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio.
La hidrólisis de la urea es catalizada por la ureasa para dar dos moléculas de amoniaco. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la descomposición de los compuestos orgánicos.
Interpretación
- Positivo:
Rojo,
Rosado intenso en el pico de la flauta.
- Negativo:
amarillo
Prueba
Malonatos
Composición
Estearato de levadura, Sulfato de amonio, Fosfato di potásico, Fosfato monopotasico, NaDI,
Malonato de socio, Glucosa,
Agua destilada.
Indicadores
Azul de Bromotimol
pH:
Verde 7.0
Amarillo 6.0
Azul 7.6
Reactivos de lectura
Ninguno
Fundamentos
El Malonato es un indicador enzimático. El ácido malonico se une ab la enzima, ya que el ácido malonico y el ácido succínico son estructuralmente muy parecidos y ocupa los sitios activos, así la enzima no puede combinarse con su sustrato, y bloquea la acción del ácido succínico es necesario la activación de la enzima-sustrato para la activación del sustrato, para formar el ácido fumarico. El ácido succínico es el causante de la inhibición de la succínica deshidrogenasa que interrumpe el ciclo de Krebs a menos que el microorganismo pueda utilizar al Malonato como única fuente de carbono.
Interpretación
Medio sin inocular verde
- Positivo:
azul de Prusia oscuro
- Negativo:
Sin cambios
Prueba
Arginina
Composición
Peptona
Extracto de carne
Fosfato de piridoxal
glucosa
agua desionizada
aceite mineral
Indicadores
Purpura de bromotimol
pH:
Amarillo 5.2
Purpura 6.8
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
La L-arginina sufre una descarboxilacion para producir agmatina. La agmatina se degrada por dos vías la acción de la enzima agmantasa rompe la molécula en dos compuestos: putresina y urea. Si la enzima ureasa está presente, la urea es catabolizada formando dos moléculas de amoniaco y CO2
Interpretación
- Positivo:
Purpura turbia a amarillo
Purpura apagado.
- Negativo:
Sin cambios
Prueba
LIA
Agar lisina
Composición
Extracto de glucosa
levadura
Peptona de gelatina
Citrato de hierro
Y amonio tiosulfato de sodio
Agar
Indicadores
Purpura de bromocresol
pH:
Purpura 6.3
Purpura 6.8
Amarillo 5.2
Reactivos de lectura
Ninguno
Fundamentos
En medio del cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para la detectar la presencia de la enzima descarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio y el sulfato de sodio. Son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual a menor a 5.2, y color violeta a pH igual o menor a 6.8.
Por descarboxilacion de la lisina se produce la amina cadaverina que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta.
La descarboxilacion de la lisina tiene lugar en medio acido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina descarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa producen un viraje de tonalidad del medio del cultivo al amarillo, pero a las 24 horas de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas y el fondo amarillo. La producción de sulfuro de hidrogeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro.
Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un ácido alfa-ceto-carbonico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.
Interpretación
Descarboxilacion de la lisina
- Positivo:
Purpura turbio- amarillo. Purpura apagado.
- Negativo:
Sin cambios
H2S
- Positivo:
Coloración negra
- Negativo:
Sin cambios
Prueba
MIO
Movilidad
Indol
ornitina
Composición
Dextrosa Extracto de levadura
Peptona
Tripteina
Clorhidrato de L-ornitina
Agar
Aceite mineral
Indicadores
Purpura de bromocresol
pH:
Purpura 6.3
Amarillo 5.2
Purpura 6.8
Reac. de lectura
Reactivo de Kovac o de Erich
Fundamentos
Cultivo semisólido, altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de levadura, peptona y Tripteina. Además, la tripteina aporta grandes cantidades de triptófano, sustrato de la enzima triptofanasa para la realización de la prueba del Indol.
La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina descarboxilasa, el purpura de bromocresol es el indicador de pH que en medio alcalino es de color purpura y en medio acido es amarillo.
Por su composición, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina descarboxilasa e Indol. La movilidad se demuestra por un entubamiento del medio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de inoculación, la reacción positiva a la ornitina está dada por un color purpura del medio. Debido a la fermentación de la glucosa se reduce el pH produciendo una condición acida y originando que el indicador de pH purpura de bromocresol vire al amarillo.
La presencia de acidez, otorga condiciones óptimas para la actividad de la enzima ornitina descarboxilasa, la cual descarboxila la ornitina presente. Por descarboxilacion, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color purpura. El Indol es producido a partir del triptófano por los microorganismos que contiene la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de kovac o de Erlich, indica un resultado positivo.
Interpretación
Movilidad
- Positivo:
Presencia de turbidez o crecimiento más allá de la línea de siembra.
- Negativo:
Crecimiento solamente en la línea de siembra.
Ornitina descarboxilasa
- positivo:
color purpura
- Negativo:
Color amarillo.
A veces se desarrolla un color violáceo en la superficie del medio.
Indol:
Se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina.
- Positivo:
Color rojo ala agregar el reactivo revelador en anillo.
- Negativo:
El color revelador permanece incoloro o amarillento o natural.
Prueba
SIM
Ácido sulfhídrico
Indol
motilidad
Composición
Tripteina peptona
Sulfato de amonio y hierro
Tiosulfato de sodio
agar
Indicadores
Ninguna
Reac. de lectura
Kovac de Erlich
Fundamentos
El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la tripteina, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar Indol.
En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El Indol producido se combina con el aldehído del reactivo de kovac o Erlich para originar un compuesto de color rojo. Las cepas móviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la punción de siembra, mientras que aquellas que aquellas cepas productoras de sulfhídrico se distinguen por la formación de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2
Interpretación
H2S
- Positivo:
color negra
- Negativo:
Sin cambios de color
Movilidad
- positivo:
Presencia de turbidez o crecimiento más allá de la siembra
- Negativo:
crecimiento solo en la línea de la siembra
Indol
- positivo:
anillo color rojo en la superficie
- Negativo:
sin cambios.
Prueba
Gelatina
Composición
Gelatina nutriente, Carbono activado agua,
corriente
Indicadores
Ninguno
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
La mayoría de los polímeros son demasiado grandes para ser transportados dentro de las células. Las bacterias excretan enzimas extracelulares que hidrolizan esos polímeros transportando al interior de la célula en monómeros que les sirven para crecer. La producción de proteasas es evaluada por incorporación de una proteína (gelatina-cisteína) en un medio solido en placa. La placa se inunda con ácido que precipita la proteína no hidrolizada.
Interpretación
- Positivo:
Hay licuefacción
- Negativo:
Medio solido
Prueba
Nitratos
Reducción de nitritos
Composición
Peptona extracto de carne
Nitrato de potasio
Agua destilada
Indicadores
Ninguna
Reac. de lectura
Alfanaftilamina y ácido sulfanilico
zinc
Fundamentos
Algunas bacterias pueden usar nitratos como aceptor final de e- en la respiración. El nitrato puede ser reducido a nitrito o en un más a gases (óxido de nitrógeno)
Las bacterias se inoculan en medios conteniendo nitrato potásico. El nitrito procedente de la reducción de células puede detectarse añadiendo Alfanaftilamina y ácido sulfanilico produciéndose un color rojo. Se puede saber si el nitrato puede haberse reducido a más que a nitritos produciéndose gas. Si al añadir zinc en polvo no hay color rojo es que no hay nitrato porque se ha reducido a gas (desnitrificaion).
Interpretación
- Positivo:
Rojo al agregar Alfanaftilamina y ácido sulfanilico
- Negativo:
Sin cambios
Al agregar zinc
- Positivo:
sin cambios
Al agregar zinc
- Negativo:
color rojo
Prueba
Hidrolisis
de
hipurato
Composición
Infusión de carne de corazón,
Caseína Peptona de levadura NaCl Hipurato de sodio
Agua destilada
Indicadores
Ninguno
Reactivo de lectura
Ninhidrina Cloruro férrico
Fundamentos
En el medio de prueba se usa una sal de hipurato que forma benzoato de sodio y lisinato de sodio por hidrolisis. Los productos finales del ácido hipúrico, acido benzoico y lisina son insolubles en agua; sus sales son solubles.
La hipuricasa produce hidrolisis en la unión peptídica del ácido hipúrico. La hidrolisis del hipurato es detectada cualquier producto final, el ácido benzoico en el medio agregando una solución de cloruro férrico acidificada, ya que es sensible al método y la lisina es detectada por el método de Ninhidrina.
Interpretación
- Positivo:
Precipitado color purpura que perdure por más de 10 minutos
- Negativo:
Sin cambios o que el precipitado desaparezca
Prueba
MR- VP
(Rojo de metilo y Voges- Proskauer)
Composición
Polipeptona digerido Pancreático de caseína, Dextrosa, Fosfato de potasio
Agua destilada.
Indicadores
Ninguna
Reac. de lectura
MR: rojo de fenol
VP: KOH
Alfa-naftol
Fundamentos
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originaran productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol, acatoina).
MR: es una prueba cualitativa basada en el uso de indicador rojo de metilo que nos indica porque vía metabólica se fermento la glucosa. La coloración roja nos indica que la glucosa es metabolizada vía ácidos mixtos.
VP: se basa en la detección de acetoina un producto final neutro derivado de la glucosa. En la prueba el primer reactivo de lectura agregado es el catalizador α-naftol que actúa como un intensificador de color, lo que aumenta la especificad de la reacción, el α-naftol se combina con el producto de la reacción del di-acetilo, y con el compuesto de tipo guanidina presente en la peptona, el KOH el 40% ayuda a los absorción de CO2, estos dos reactivos ayuda a la reacción para que produzca el di-acetilo, que es una sustancia reactante activa.
La prueba de VP: está basada en la reacción de di-acetilo, y el núcleo de guanidina aquí presente en la arginina. Es necesario un grupo amino libre disponible en la molécula de guanidina proveniente de la arginina en la peptona para el desarrollo de color.
Cuando se mezclan en proporciones correctas di-acetilo peptona y α-naftol, se desarrolla de manera casi instantánea una coloración roja en la superficie del medio.
Interpretación
MR:- Positivo:
Cambio de color rojo
- Negativo:
Sin cambios amarillo
PV:
- positivo:
Anillo rojo en la superficie que aparezca y persista 10 minutos
- Negativo:
Sin cambios amarillo o desaparece el anillo en el transcurso de 10 minutos
Prueba
Fermentación de Carbohidratos son:
salicina o manitol o maltosa.
Composición
Caldo básico peptona 10%
Carbohidratos 1%
Extracto de carne 1g
NaCl 5g
Agua destilada 1L
Indicadores
Rojo de fenol
pH:
Amarillo 6.8
Rojo 8.4
Reac. de lectura
Ninguna
Fundamentos
La fermentación es un proceso metabólico, las bacterias que fermentan hidratos de carbono son por lo general anaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentación de un hidrato de carbono es degradada y descompuesto en dos moléculas de carbono triosas que son nuevamente degradadas. Los productos finales varían con cada especie bacteriana, del carbohidrato y del sistema enzimático de la especie.
Interpretación
Medio sin inocular naranja rojizo.
- Positivo:
Amarillo
- Negativo:
Sin cambios de color rojo
Prueba
Hidrolisis de bilis esculina
Composición
Peptoina de caseína, Peptona de carne, Extracto de levadura, Esculina,
Oxgall bilis
NaCl
Citrato de hierro y amonio,
Citrato de sodio,
Acida sódica Agar
Agua destilada
Indicadores
Ninguno
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
Los acetales se hidrolizan con facilidad por la acción de los ácidos, la base de la prueba de la esculina es la hidrolisis en la ligadura beta de la esculina a esculetina, por una beta glucosida constitutiva la cual libera una molécula de glucosa.
La esculetina reacciona con una sal de hierro 3 para formar un complejo fenólico de color castaño oscuro o negro. El citrato férrico y de amonio es incorporado al medio de bilis y esculina de 0.05% como indicador de hidrolisis de la esculina se produce en 2 pasos:
a) Crecer en presencia de una concentración particular de bilis.
b) Producir esculinasa para hidrolizar la esculina.
Interpretación
- Positivo:
Precipitado
Negro
- Negativo:
Sin cambios
Prueba
Factor CAMP
(Son las siglas de los descubridores de dicho factor).
Composición
Agar sangre
Indicadores
Ninguno
Reac. de lectura
Ninguna
Fundamentos
Una proteína llamado factor K que interactúa con beta hemolisina, producida excretada por staphylococus aureus, produce aumento sinérgico de la hemolisis, y se ve una zona en forma de punta de flecha, donde se observa una mayor hemolisis cerca de la unión de las dos estrías de desarrollo.
Interpretación
- Positivo:
Punta de flecha
Negativo:
No hay sinergismo
Prueba
Antibiograma
Composición
Discos con: Bacitracina
Vancomicina
Optoquina
Penicilina
Amikasina
Cloranfenicol
Indicadores
Medio de cultivo:
Müller-Hilton
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
Observar la resistencia a los antibióticos de la cepas, observando si hay o no crecimiento bacteriano alrededor de los discos.
Interpretación
- Positivo:
Sensible: halo de inhibición de acuerdo con el antibiótico.
- Negativo:
Resistente: sin halo o menor de acuerdo al antibiótico
 |
| Agar Mueller Hulton |
 |
| Agar Mueller Hilton |
Prueba
Coagulasa
Composición
Plasma de Humano o conejo
Indicadores
Ninguno
Reac. de lectura
Ninguna
Fundamentos
Detectan ambos coagulasas la libre y la ligada siendo la única distinción entre ambos la antigénica. La coagulasa libre extracelular reacciona con una sustancia libre en el plasma (factor del suero), denominado también factor de reacción de la coagulasa (CRF), una sustancia termoestable similar a la trombina.
El CRF es un activador, es una molécula derivada o modificada de la trombina. La coagulasa libre extracelular reacciona con el CRF formando un complejo. Este complejo actúa de manera indirecta para convertir el fibrinógeno a fibrina, durante la coagulación se liberan péptidos similares a partir de fibrinógeno y del complejo coagulasa CRF, la diferencia principal es que el CRF que reacciona con la coagulasa no requiere iones de calcio para formar el coagulo y es inestable a la heparina.
- Positivo:
Formación de un coagulo
- Negativo:
No hay coagulo sin cambios
 |
| Coagulasa positiva y negativa |
Prueba
Agar MC
(Mac Conkey)
Composición
Peptona pluripeptona
Lactosa
Mezcla de sales biliares
Cloruro de sodio
Agar
Rojo neutro
Cristal violeta
Indicadores
Rojo neutro
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram Positiva.
Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
- Positivo:
Crecimiento bacteriano,
Fermentador cambio de color colonias rojo neutro
- Negativo:
Sin crecimiento bacteriano,
No fermentador colonias incoloras
 |
| Agar Mc conkey |
Prueba
Agar TCBS
(Tiosulfato citrato bilis sacarosa)
Composición
Extracto de levadura Sacarosa Peptona de Caseína Cloruro de Sodio Peptona de carne Tiosulfato de Sodio Bilis disecada Colato de sodio Citrato de hierro Agar bacterioteriologico.
Indicadores
Azul de timol.
Azul de bromotimol pH:
Verde 7.0
Amarillo 6.0
Azul 7.6
Reac. de lectura
Ninguna
Fundamentos
El agar TCBS, por las iniciales tiosulfato-citrato- bilis-sacarosa, es preparado de acuerdo con la fórmula de kobayashi y col. Siendo una modificación del medio de nakanishi. En el agar TCBS cresen todas las especies de Vibrio patógenas patógeno para el humano excepto V. holliseae.
Las muestras pueden ser de materiales tanto clínicos como no clínicos. El agar TCBS es altamente selectivo para las especies de Vibrio debido a sus componentes nutricionales y ala alta concentración de sales y es ampliamente utilizado en placa para el primo-aislamiento.
Este medio junto en el agua peptonada alcalina es utilizado para el aislamiento de Vibrio cholerae y otras especies a partir de muestras fecales.
En este medio el extracto de levadura y las peptonas proporcionan la fuente de nitrógeno, vitaminas y aminoácidos. El citrato de sodio, el tiosulfato de sodio y la bilis actúan como agentes inhibidores de microorganismos Gram positivos y coliformes dando alcalinidad al medio.
La sacarosa es el carbohidrato fermentable. El cloruro de sodio promueve el crecimiento, el tiosulfato de sodio es la fuente de sulfuro y el citrato de hierro es un indicador para detectar la producción de H2S. El azul de timol y bromotimol actúa como indicadores de pH. El agar bacteriológico es agregado como agente solidificante.
Después de 24 horas de incubación la sacarosa es fermentada por los vibrios que dan colonias de tamaño mediano, lisas, opacas, de color amarillo. V. vulnifucus no fermenta la sacarosa presentando una coloración verde del medio agar.
Interpretación
- Positivo:
Crecimientos de microrganismos en investigación o estudio.
- Negativo:
Sin crecimientos en el medio o crecimientos de poca importancia.
 |
| Agar TCBS |
 |
| Agar TCBS |
Prueba
Agar VB.
Verde
brillante
Composición
Pluripeptona
Extracto de levadura Cloruro de sodio,
Lactosa, Sacarosa, Rojo de fenol,
Verde brillante Agar
Indicadores
Rojo de fenol
Reac. de lectura
Ninguna
Fundamentos
En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentable, el rojo de fenol es el indicador de pH, que vira al amarrillo cuando hay producción de ácido a partir de la fermentación azucares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como agente selectivo.
Interpretación
- Positivo:
Crecimientos de microrganismos en investigación o estudio.
- Negativo:
Sin crecimientos en el medio o crecimientos de otros microorganismos no deseados.
 |
| Agar Verde brillante |
Prueba
Agar SS
Salmonella- Shigella
Composición
Pluripeptona Extracto de carne, Lactosa, Mezcla de sales,
Citrato de sodio,
Agar,
Verde brillante,
Rojo neutro
Indicadores
Rojo neutro
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, está dada por las sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus sp.
Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y la formación de ácido sulfúrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas un fondo rojizo.
Salmonella Shigela y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La producción de ácido sulfúrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro.
Interpretación
Salmonella typhimurium ATCC 14Transparente
Shigella flexneri
Shigela sonnel
Colonias Incoloras
Proteus mirabilis
ATCC 43071
Transparente s, centro negro
Eschirichia coli
ATCC25922
Rosadas a rojas
Klepsiella pneumoniae
ATCC700603
Rosadas cremosas y mucosas.
- Positivo:
Crecimiento de microorganismos en estudio.
 |
| Agar SS |
 |
| Agar SS |
Prueba
Agar XLD
Xilosa
Lisina
desoxicolato
Composición
Xilosa
L-lisina
Lactosa Sacarosa
NaCl
Extracto de levadura
Desoxicolato de sodio
Tiosulfato de sodio
Citrato férrico
amonio
Indicadores
Rojo de fenol
Reac. de lectura
Ninguna
Fundamentos
XLD agar es un medio selectivo y de diferenciación. Contiene extracto de levadura como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y por consiguiente, inhibe los microorganismos Gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prácticamente todos los entéricos, excepto shigella, y esta propiedad hace posible la diferenciación de dicha especie.
La lisina se incluye para permitir la diferenciación del grupo Salmonella de los organismos no patógenos, dado que sin lisina, Salmonella fermentaría rápidamente la xilosa y no se distinguiría de las especies no patógenas.
Cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada por la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino que imita la reacción de Shigella.
Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes positivos ala lisina, se añaden lactosa y sacarosa para producir acido en exceso.
Para aumentar la capacidad de diferenciación de la formula se incluye, un sistema indicador de H2S formado por tiosulfato sódico y citrato férrico amónico, para la visualización del ácido sulfhídrico producido, lo que origina la formación de colonias con centro de color negro. Los organismos no patógenos no producen de H2S no descarboxila la lisina; por tanto la reacción acida producida por dichos organismos evita el oscurecimiento de las colonias, lo que sucede solo con pH alcalino o neutro.
Interpretación
Salmonella typhimurium
Colonias rojas con centro negro
Salmonella adony
Colonias rojas con centro negro
Shigella flexneri
Colonias rojas
Shigella sonnel
Colonias rojas
Enterococcus fecaelis
Inhibición de parcial a compleja
Eschirichia coli
Inhibición de parcial a compleja colonias rojas a amarillentas
Proteus mirabilis
Colonias rojo carmesí con centros negros proliferación inhibida
 |
| Agar XLD |
 |
| Agar XLD |
 |
| Agar XLD |
Prueba
Agar EMB
Eosina azul de metileno
Composición
Peptona Lactosa
Sacarosa
Fosfato dipotasico
Agar
Eosina
Indicadores
Azul de metileno
Reac. de lectura
Ninguna
Fundamentos
La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y /o sacarosa y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; estos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Eschirichia coli y Citrobacter sp. Presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que lo que no lo hacen es incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida sp.
Como colonias rosadas y puntiformes la siembra en profundidad permite el desarrollo clamidosporas de Candida albicans. Enterococcus sp. Crese en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que acinetobacter sp. Y otras bacterias oxidativas pueden dar de colonias color azul lavanda; esto puede ocurrir un que las cepas no sean capaces acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella- Shigella.
Interpretación
- Positivo:
Crecimientos de microrganismos estudio.
- Negativo:
No hay crecimiento
o crecimiento de microrganismo no deseados
 |
| Agar EMB |
 |
| Agar EMB |
 |
| Agar EMB |
Prueba
Agar AST
Agar soya tripicaseina
Composición
Peptona de caseína,
Peptona de soya,
Cloruro de sodio
Agar bacteriológico
Indicadores
Ninguno
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
En el medio las peptonas proveen la fuente de nitrógeno y minerales. El azúcar de la peptona de soya provee la fuente de carbohidratos. El Cloruro de sodio tiene su función en el balance osmótico y el agar es incorporado como agente solidificante.
Interpretación
- Positivo:
Crecimientos de microrganismos en investigación o estudio.
- Negativo:
Sin crecimientos en el medio
 |
| Agar soya tripticaseina |
Prueba
Agar AS
Agar sangre
Composición
Infusión de musculo de corazón peptona NaCl
Agar
Sangre de carnero
Indicadores
Ninguno
Reac. de lectura
Ninguna
Fundamentos
La infusión de musculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aun de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10% aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemolisis. Hemolisis alfa α
Hemolisis beta β
Hemolisis gamma γ
Interpretación
- Positivo:
Crecimientos de microorganismos estudio.
- Negativo:
No hay crecimiento
o crecimiento de microrganismo no deseados
 |
| Agar gelosa sangre |
Prueba
Agar cetrimida
Composición
Peptona de gelatina
Cloruro de magnesio
Sulfato de potasio
Indicadores
Ninguno
Reactivo de lectura
Ninguno
Fundamentos
La fórmula de este medio está desarrollada para favorecer la selección de Pseudomona aeroginosa
y estimular la formación de pigmentos. Es este un medio muy semejante al King A, en el cual el
cloruro de magnesio y el sulfato de potasio promueven la formación de piocianina, pioverdina y
piomelanina de Pseudomona aeroginosa.
La cetrimida es un detergente catiónico que actúa como agente inhibidor, libera el nitrógeno y el fósforo de las células de casi toda flora acompañante, aunque inhibe también algunas especies de Pseudomonas.
Interpretación.
- Positivo:
Crecimientos de microorganismos en investigación o estudio.
- Negativo:
Sin crecimientos en el medio
 |
| Agar centrimida con presencia de microorganismos |
No hay comentarios:
Publicar un comentario