Baterías Bioquímicas en un Laboratorio Clínico

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Anemia Hemolítica

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Leucemia mieloblastica Aguda

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Defectos estructurales de la Hemoglobina (Hemoglobinopatias y Talasemias)

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Control de calidad, regla de westgard

Control de calidad, regla de westgard Hematologia

Interpretación

Los controles usados en este análisis la mayoría  cumplen con la regla de westgard. Solo La 1 2SD Indica que el control evaluado excede el  límite de 2 desviaciones estándar violación rechazo.

Según  la regla de westgard dice que:

REGLA 1  3SD

Esta regla detecta un inaceptable error aleatorio y el inicio de un posible error sistemático.

La corrida debe considerarse fuera de control por exceder 3SD. En este caso se rechaza la corrida

REGLA 2    2SD  Esta regla detecta un error sistemático.  Se identifica cuando dos puntos consecutivos exceden del mismo lado 2SD  En este caso la corrida se rechaza

REGLA R 4SD  Esta regla detecta un error aleatorio intracorrida. Se presenta cuando dos valores consecutivos de dos diferentes controles exceden 4SD. En este caso la corrida se rechaza

REGLA 4

1SD Cuatro resultados de control superan 1SD del mismo lado, no requiere rechazó de la corrida .Identifica pequeños errores sistemáticos (2 controles) o diferencias analíticas (1 control) que no tienen significado clínico, y se resuelven con una calibración o mantenimiento del sistema

REGLA 10x Se identifica cuando 10 puntos consecutivos exceden del mismo lado 1SD.

 Para un control indica una diferencia sistemática (error) en un área de la curva de calibración.

 Para dos controles indica una diferencia sistemática (error) en toda la curvada calibración.

 La violación de la regla no requiere rechazo de la corrida.

Imagen 1:

linea de centro para arriba 1 (+1DS)   ↑

linea de centro para arriba 2 (+2DS)   ↑ 

linea de centro para arriba 3 (+3DS)   ↑

linea de centro (media)                        ←

linea de centro para abajo 1 (-1DS)   ↧

linea de centro para abajo 2 (-2DS)   ↧

linea de centro para abajo 3 (-3DS)   ↧

Ciclo de vida da Leishmania no homem

La leishmaniosis. 

es transmitida por la mordedura del díptero Phlebotomus conocido como la mosca de los arenales.  Las moscas de los arenales inyectan el estadio infectante, promastigotes, cuando se alimentan de sangre 

• Los promastigotes que alcanzan la herida abierta, son fagocitados por los macrófagos
• y se transforman en amastigotes
• Los amastigotes se multiplican en las células infectadas y afectan a los diferentes tejidos, dependiendo en parte de la especie de Leishmania
• Esto origina las manifestaciones clínicas de leishmaniosis.  Las moscas de los arenales se infectan al alimentarse de la sangre del hospedador infectado, ingiriendo los macrófagos infectados con amastigotes
• En el estómago de la mosca de los arenales, el parásito se desarrolla en promastigotes
• los cuales se multiplican y migran hacia la probóscide...

La leishmaniosis es una enfermedad transmitida por la mosca de los arenales como vector y es causada por un protozoario intracelular obligado del género Leishmania.  La infección humana es causada por 21 a 30 especies que infectan a los mamíferos.  

Estas incluyen el complejo de L. donovani con 3 especies: 

• (L. donovani,
•  L. infantum y 
• L. chagasi)
• (L. mexicana, 
• L. amazonensis y 
• L. venezuelensis); 
• L. tropica; 
• L. major; 
• L. aethiopica

Y el subgénero Viannia con 4 especies principales: 

• (L. (V.) braziliensis, 
• L. (V.) guyanensis, 
• L. (V.) panamensis y 
• L. (V.) peruviana).  

Ciclo de vida de Leishmania.

El ciclo de vida comienza cuando el hospedero recibe la picada del insecto infectado. Los parásitos son inoculados a la piel y fagocitados por macrófagos y células dendríticas, en donde la forma intracelular del parásito (amastigote) se replica. La ruptura de los macrófagos infectados propaga la enfermedad. Cuando un nuevo insecto ingiere sangre de un hospedero vertebrado infectado, los amastigotes se diferencian a promastigotes en el intestino medio del vector donde permanecen de 4 a 7 días, migran a la válvula cardiaca y están listos para re-inocular a otro hospedero. 

Agentes causales 

El complejo L. mexicana con tres especies principales 

Siendo especies diferentes son morfológicamente indistinguibles, pero se pueden diferenciar por el análisis de isoenzimas, métodos moleculares o anticuerpos monoclonales.

Distribución geográfica

La leishmaniosis se encuentra en cerca de 88 países.  Aproximadamente 350 millones de personas viven en esas áreas.  Los países más afectados son los tropicales y subtropicales.  La leishmaniosis se encuentra en lugares cercanos a las selvas tropicales de América central y del sur, así como en los desiertos del oeste de Asia.  Más del 90% de los casos que corresponden a leishmaniosis visceral están en la India, Bangladesh, Nepal, Sudán y Brasil.

La leishmaniosis se encuentra en México, América central y del sur, desde el norte de Argentina hasta el sur de Texas (no en Uruguay, Chile o Canadá), la parte sur de Europa (leishmaniosis no es común en los viajeros del sur de Europa), Asia (no del sureste de Asia), el Medio Oriente y África (particularmente este y norte de África, con algunos casos en otros sitios). 

Dr. Nick Finlay

Análisis clinico de ELISA

Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA)

Enzimoinmunoanálisis de absorción. (ELISA)

ELISA es el acrónimo en inglés para enzimo inmuno análisis de absorción. Se trata de un examen de laboratorio comúnmente usado para detectar anticuerpos en la sangre. 

Un anticuerpo es una proteína que el sistema inmunitario del cuerpo produce cuando detecta sustancias dañinas, llamadas antígenos.

Forma en que se realiza el examen

Es necesaria una muestra de sangre. La mayoría de las veces, la sangre se extrae de una vena que se encuentra en el interior del codo o del dorso de la mano. 

La muestra se envía a un laboratorio donde el anticuerpo o antígeno objeto de estudio se vincula a una enzima específica. Si la sustancia a estudiar está presente en la muestra, la solución de la prueba se torna de un color diferente.

Pruebas bioquímicas en área de la Microbiologia Clínica

Aquí se presenta una batería de pruebas bioquímicas mas utilizadas en el campo o área de la microbiologia clínica. Espero sea de gran utilidad para ampliar sus conocimientos adquiridos.
Presentado por: Dr. Nicanor Finlay Henriquez

Nota: las pruebas bioquímicas tienen muchas variantes e interpretación aquí se menciona en forma general.

Baterías Bioquímicas 

Prueba
Tinción de Gram

Composición
Agua estéril, cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, safranina.


Indicadores
Ninguno

Reactivos de lectura
Ninguno

Fundamentos

La membrana de las bacterias contiene Peptidoglicano, cuando de adiciona cristal violeta y lugol forman un complejo cristal violeta- yodo. 

La diferencia que  se observa en la resistencia  a la decoloración, se debe a que la  membrana externa de Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona la capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta- yodo que se formó  previamente.

Por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose el complejo azul violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer  una pared celular más resistente  y con mayor proporción de peptidoglicano, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa  deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta-yodo y manteniéndola la coloración azul violácea.

Interpretación

• Gram positivas:

moradas a azules

• Gram negativas

roja a rosa

Prueba
Oxidasa

Composición
Discos con N, N, N, N
Tetrametil-p-fenilendiamina.

Indicadores
Ninguno

Reactivo de lectura
Ninguno

Fundamentos

Se basa en la producción bacteriana de una enzima oxidasa intracelular, esta reacción de oxidasa se debe a un sistema de citocromo oxidasa que activa la oxidación del citocromo reducido por el oxígeno molecular que a su vez, actúa como un receptor  de electrones en la parte terminal del sistema de transferencia de electrones.

Reacción química: los colorantes de p-fenilendiamina son aminas aromáticas primarias derivados, diamino del benceno, el citocromo oxidasa no reacciona directamente con el reactivo p-fenilendiamina pero oxidasa al citocromo C que a su vez oxida al reactivo, la fenilendiamina es metilada y cuantos más grupos metilados introducen en el radical amino el color es más azul. Si se introducen tres grupos fenilos en ligar del metilo el color es aún más oscuro.

Interpretación

• Positivo:

Azul marino

• Negativo:

Sin cambio de color

Prueba
Catalasa

Composición
Peróxido de hidrogeno
30%

Indicadores
Ninguno

Reactivos de lectura
Ninguno


Fundamentos

La catalasa actúa como una enzima esencial de defensa biológica contra la toxicidad del oxígeno. La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua.

Interpretación

• Positivo:

Efervescencia burbujeo

• Negativo:

Sin cambios

Prueba
O/F Oxidación Fermentación.

Composición
Medio básico de Hugh Leifson peptona, NaCl, Fosfato de potasio, Hidratos de carbono, Agar, Agua destilada.

Indicadores
Azul de bromotimol, pH: Verde  7,0  Amarillo  6,0  Azul  7,6

Reactivo de lectura
Ninguno

Fundamentos

Se basa en la determinación del metabolismo oxidativo o fermentativo de un hidrógeno de carbono. Son necesarios dos tubos del medio para la prueba. El medio de un tipo se expone al aire y el otro se cubre con aceite mineral o parafina líquido. Las bacterias oxidativas producen ácido solo en el tubo abierto expuesto al oxigeno atmosférico;  los microorganismo fermentadores producen ácidos en ambos tubos; las bacterias no sacaroliticas son inertes en este medio y permanecen con un pH alcalino.

Interpretación

O/F

Amarillo a amarillo.
fermentativo facultativo

Amarillo a verde:
oxidativo

Azul- azul 
No fermentador usa peptonas.

Prueba
Gota suspendida

Composición
Agua estéril


Indicadores
Ninguno


Reactivos de lectura
Ninguno

Fundamentos

Algunas bacterias son móviles por presentar flagelo, los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posiciones variadas. La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil.

Interpretación

• Positivo:

Movimiento de un lado a otro del campo.

• Negativo:

Sin movimiento o movimiento gausuano.

Prueba
TSI 
hierro triple azúcar

Composición
Estrato de carne polipeptona, Cloruro de sodio, Lactosa, Glucosa, Sacarosa, Sulfato de hierro, Amonio, Tiosulfato de sodio, Agar.

Indicadores
Rojo de fenol pH: 
Amarillo 6,8 
Rojo 8,4

Reactivo de lectura
Ninguno

Fundamentos

Ninguno Medio empleado para la diferenciación de la fermentación de  glucosa, lactosa y la producción de ácido sulfúrico. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfúrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro, rojo de fenol es el indicador de pH, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. Por fermentación de azucares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionado el típico sulfuro de hierro de color negro.

Interpretación

• Positivo para fermentación:

Rojo

• Negativo: 

amarillo

Gas 

• positivo: 

cuarteado o botado el agar

• Negativo:

sin cambios

H2S

•  positivo:

 Negro

• Negativo:

sin cambios

Prueba
KIA 
Agar de hierro de kliger


Composición
Extracto de carne peptona, Glucosa, 
Citrato férrico amónico, Lactosa,
 Cloruro sódico, Tiosulfato sódico, 
Extracto de levadura.


Indicadores
Rojo der fenol
pH: 
Amarillo 6,8
Rojo 8,4


Reactivos de lectura
Ninguno


Fundamentos

En este medio se observa si la bacteria es capaz de fermentar glucosa y lactosa, si es así los carbohidratos forman ácidos que hacen que vire el indicador del medio, además si  tiene producción de ácidos sulfúrico; el tiosulfato es un intermediario que reduce el sulfato a H2S en el metabolismo de la bacteria, el tiosulfato remplaza al sulfato como de azufre.

El H2S reacciona con el citrato de amonio férrico, produciendo un precipitado insoluble negro. También sirve para ver la producción de gas, cualquier gas que produzca la bacteria. Fermentación de sacarosa: Pico o flauta. ácido- ácido: fermentador ácido-alcalino: no fermentador Alcalino- alcalino: no sacarolitica.

Interpretación
Gas: 

• positivo

Cuarteado o botado el agar

• Negativo

Sin cambios

H2S: 

• positivo

Coloración Negra

• Negativo

Sin cambios.

Prueba
Citratos

Composición
Sulfato de magnesio, Fosfato monobásico, Fosfato dipotasico, Citrato de sodio NaCl,  Agar,  agua desionizada

Indicadores
Azul de bromotimol pH. 
Verde 7,0
Amarillo 6,0
Azul 7,6


Reactivo de lectura
Ninguno 


Fundamentos

Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y compuesto amoniacales como única fuente de nitrógeno.

Interpretación
Medio sin inocular: verde

• Positivo:

azul de Prusia oscuro

• Negativo:

sin cambios

Prueba
Urea
Stuart


Composición
Fosfato monopotasico, Fosfato disódico,
Extracto de levadura,
Urea,
Agua desionizada


Indicadores
Rojo de fenol 
pH: 
Amarillo 6,8
Rojo 8,4


Reactivos de lectura
Ninguno


Fundamentos

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos moléculas de amoniaco por la acción de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio.

La hidrólisis de la urea es catalizada por la ureasa para dar dos moléculas de amonio. La ureasa es una enzima microbiana vinculada con la descomposición de los compuestos orgánicos.

Interpretación

• Positivo:

 Rojo, 
Rosado intenso en el pico de la flauta

• Negativo:

 amarillo

Que es es la Microbiologia.

La microbiología es la ciencia encargada del estudio y análisis de los microorganismos, seres vivos pequeños no visibles al ojo humano también conocidos como microbios. Se dedica a estudiar los organismos que son sólo visibles a través del microscopio.

hay dos clases principales según el estudio científico:

1. Procariotas.
2. Eucariotas.

Laboratorio de Análisis Clínico
Dr. Nick Finlay

Son considerados microbios todos aquellos seres vivos microscópicos, estos pueden estar constituidos por una sola células unicelulares, así como pequeños agregados celulares formados por células equivalentes  sin diferenciación celular, y otras con células bien formadas.

Eucariotas: células que poseen envoltura nuclear tales como hongos, bacterias helmintos entre otras mientras que las procariotas: son aquellos que no poseen una envoltura bien formada y es sencilla.

Sin embargo la microbiología tradicional se ha ocupado especialmente de los microorganismos patógenos entre bacterias, virus y hongos, dejando a otros microorganismos en manos de la parasitologia y otras categorías de la biología.

Aunque los conocimientos microbiológicos de que se dispone en la actualidad son muy amplios, todavía es mucho lo que queda por conocer y constantemente se efectúan nuevos descubrimientos en este campo maravilloso de la ciencia.